五千年(敝帚自珍)

主题:【原创】创造生命还是山寨生命,这是个问题 -- 二胡

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家园 测序仪包括PCR仪的功能

简单来说测序仪先进行一个PCR反应,再跑电泳进行测序。

另:当年没有PCR仪的时候做扩增为什么还需要冰箱,据我所知PCR扩增的温度循环在95——(50-60)——72之间,难道为了快速降温么

家园 送你一宝,得一宝,收支平衡

"永动机"超前使用,只怕今后缩短使用期。四,五十岁后,只怕毛病百出。科技达人提前向马克思报到的,俺也听说过,请注意:奔向大牛的路上,也会有倒卧(我妈妈的同学就是如此,当时在上海还惊动媒体。他穿着破旧,被人当做要饭的饿死街头,事后查证他是大学教授。)

家园 我记得当年听讲座说的是十几度,记错了?

  我说的冰箱实际上他们用的是冷水。我不是干这个的所以具体数字也没记住,只记得在九十几度与低温之间快速反复变化,

  当年听过讲座后曾经设想过自己制造自动PCR扩增仪,需要速度比较快的加热和降温。因为要求温度变化快,降温打算用铜管通冰水。

  当时只是务了虚,没务实。

家园 454 需要先做个PCR

但以前的老方法,如sanger sequencing,和最新的一些还在测试的方法,是可以不用PCR的。

家园 不是大牛,知道的也不多

不过A, T, G, C四个碱基是可以加上不同荧光的。仪器看见什么颜色的荧光就知道是什么碱基了,挺简单的。

后面大概你想问最小的基因有多大?据这篇文章外链出处,最小基因是八个氨基酸,也就是二十一个碱基。

在所有蛋白基因里,只要你在开头的时候改变(增或减)一对碱基,足以废掉整个基因。

家园 那些“永动机”们都不是只会搞科研的主

打扑克,下军旗比谁都起劲,通宵达旦地玩。狡猾大大的,所以应该不会过劳死。其实我在琢磨的是,如果一个成年人每天只睡四、五个小时,但保证好营养和锻炼,不知道是不是并不影响身体健康。

女士有美容的问题,不推荐熬夜。

家园 中国十六个重大科研专项里包括中药的机理研究

你要是能挤进去的话,也就不用在美国混了,经费情况好过美国

家园 是废掉整个基因还是改变整个基因?

就是说“开头的时候改变(增或减)一对碱基”会不会变成另一种基因?

家园 就是说最新的一些方法用极微量的DNA就可以测序了?
家园 新方法主要是在成本上,规模上,灵敏度上下功夫

其中成本是决定性因素。DNA的量在大部分情况下都不是限制因素,除了环境科学,一般来讲,DNA都很容易得到的,所以不太需要在微量DNA上找方法。

家园 是废掉,让它失效。

把一个基因变成另一个基因操作麻烦,但理论上也很简单。一个基因无非是ATCG。就像我们写文章一样,就那些几千或者一万个字。重新排列组合,一篇文章就是另一篇文章。

接下来二胡要开讲合成生物学了,你就会更清楚我是什么意思了。对了,游mm一个多礼拜前有篇文章就是讲这个的。在这里 游识猷:【原创】天书中的涂鸦 ——以DNA为纸墨,写你不朽之名

家园 我的问题实际上是

两个不同的基因中碱基对排列的差距有多大?

  换一种说法就是当生物修复自己的基因时,因出错而变成另一种可遗传的基因(不是废掉)的机会有多大?

  我想自然界生物的变异应该都是从基因修复或自己组成时出错导致的。

家园 用PCR不就是为了把微量DNA扩增到可以测序的数量么?

  好象说最早做动物DNA比对得几毫升血,有了PCR后有点看不见的血痕都可以做。

家园 我见过务实的

早期的PCR仪器,就是三个大锅,煮三锅水,然后一个机械臂抓着PCR管子在三个锅里蘸来蘸去。因为要防止水蒸发,锅里的水表面要用矿物油盖起来,那个屋子里的味道别提多难闻了。

实际上PCR反应体积很小,一般才0.05mL,用目标温度的循环水降温就足够了。因为对最终达到的温度的精确度要求比较高,所以用冰水反而是不行的,因为那样你就不知道管子里最后是多少度了。

家园 分情况,很多情况下样品量很足的

像法医学这样的,如您说的,是一般得搞搞PCR,因为样品里目标序列的浓度很低。如果样品是放在细菌里长的质粒,就未必需要扩增,因为那个量一般都很大。PCR本身不是测序的一部分,只是制备样品的手段。

目前最常用的双脱氧核苷酸测序反应(sanger法)本身,是单个的聚合酶反应,不是链式反应,没有指数扩增,也不需要嗜热性的聚合酶,用普通的DNA聚合酶在37度反应一会儿就行。

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