五千年(敝帚自珍)

主题:【原创】这是真的吗?Maxipreps concentration=4163.1ng/ul?! -- 大鹏翔宇

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家园 过谦过谦

俺还连瓶底都不满呢

在lab里俺是新兵。像萨姆兄说的:“新兵就是要在各位大虾的帮助下一步一步成长起来的。”

谢谢您了。

家园 不客气,咱们相互学习

家园 花并等着

“萨达姆哪里拱”---一个中国学生眼中的英国生物实验室

另--- 想找大虾请教一下关于机械的问题,俺该去哪呢? 最近萨姆的老爷车出了点小毛病....

家园 呵呵,RP这个东西就是说不清楚的啦

咱也讲的是咱怎么提的质粒啊,只要是DNA,就能设法浓缩一点,所以浓度高肯定不是问题,问题是产量/纯度

质粒本身的结构通常被认为是决定质粒产量的主要因素,但是通常maxiprep的KIT,其限制性因素是柱子本身的容量,150mlLB,培养像pBlue这样的质粒,我用传统的裂解/PEG纯化,稍微用心一点1mg产量是肯定不止的,如果用KIT,超过容量的部分,都被洗脱了.那么柱子的最大容量是多少呢?这个就highly depends on RP了,呵呵.

家园 去问晨枫老大,他可是专家
家园 收到

花谢大鹏兄。

家园 建议酶切鉴定一下好了

通常不会有问题。

关于浓度的问题,不用担心,用最大质粒提取试剂盒的时候,因为你是用洗脱液最后将在树脂上吸附的质粒给洗脱下来,所以,加的洗脱液的体积与最后的浓度直接相关。我们用150毫升菌液提取的时候,大体上可以回收到1.5-3毫克的DNA,如果用1毫升洗脱液,那么最后的浓度一般为1.5-3毫克每毫升。没什么奇怪的。如果用的洗脱液浓度体积进一步缩小,浓度也会相应提高。

理论上,最大质粒提取试剂盒每一支可以最大吸附7毫克的DNA。只不过一般很难见到罢了,我曾经用250毫升菌液得到过5毫克每毫升的浓度。

这次也许是你这次人品坚挺(呵呵),加油,好好干!

家园 酶切的结果出来了

质粒图:

TK

点看全图

SV40

点看全图

电泳图:

点看全图

1.DNA 1kb ladder

2.TK(1000×dilution)

3.TK+BamHI

4.TK+BamHI+Xba-I

5.TK+BamHI+BglII

6.SV40(1000×dilution)

7.SV40+BamHI

8.SV40+BamHI+Xba-I

9.SV40+BamHI+BglII

师兄师姐说看上去没问题,还说这个浓度破了实验室的记录了。

这个酶切对吗?

家园 鹏弟啊,看了我一声叹息。

老了!

家园 莲兄啊,看了我万分惶恐。

您哪里老了吗?!

我这个新兵还得向您多请教关于我课题的选择呢!

再说咱这门本来就没有新老一说,活到老学到老,很正常啊,毛主席他老师的教导嘛!

家园 莲兄,这在对什么暗号阿?我就跟您熟,这是搞生化的?天王盖地虎!
家园 宝塔镇河妖, 什么来路?

这是生化.

These "bands" are DNA fragments.

DNA molecues have also been tried in making computer chips. It worked, but........

家园 莫哈莫哈,脸怎么红了?能不能讲讲“making computer chips。。”?
家园 莲兄,我听说的DNA chips是一种

做PCR的装置啊?

难道已经应用在电脑上了?难道我四年前的胡思乱想实现了?

请仔细讲一讲啊,花先送上。

家园 check this:

外链出处

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